大家好，今天给各位分享为什么间接法ELISA不能直接用酶标记的一些知识，其中也会对elisa为什么不建议做实验进行解释，文章篇幅可能偏长，如果能碰巧解决你现在面临的问题，别忘了关注本站，现在就马上开始吧！
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elisa和pcr的优劣
elisa和pcr测试的目的不一样，不过要说有说服力，两个都还不错，elisa有定量和定性分别，可以检测具体含量以及阴阳性，pcr直接就是扩增测试出结果，仅供参考。
PCR扩增严格遵守碱基配对原则的半保留复制。半保留复制是世界上最严格的复制方式之一,其新合成的子链与模板形成完全互补的镜像结构。
elisa反应颜色变化
显色是ELISA中的后一步温育反应，此时酶催化无色的底物生成有色的产物。反应的温度和时间仍是影响显色的因素。在一定时间内，阴性孔可保持无色，而阳性孔则随时间的延长而呈色加强。
适当提高温度有助于加速显色进行。在定量测定中，加入底物后的反应温度和时间应按规定力求准确。定性测定的显色可在室温进行，时间一般不需要严格控制，有时可根据阳性对照孔和阴性对照孔的显se情况适当缩短或延长反应时间，及时判断。
OPD底物显色一般在室外温或37℃反应20-30分钟后即不再加深，再延长反应时间，可使本底值增高。OPD底物液受光照会自行变色，显色反应应避光进行，显色反应结束时加入终止液终止反应。OPD产物用硫酸终止后，显色由橙黄色转向棕黄色。
TMB受光照的影响不大，可在室温中置于操作台上，边反应观察结果。但为保证实验结果的稳定性，宜在规定的适当时间阅读结果。TMB经HRP作用后，约40分钟显色达，随即逐渐减弱，至2小时后即可完全消退至无色。
TMB的终止液有多种，叠氮钠和十二烷基硫酸钠(SDS)等酶抑制剂均可使反应终止。这类终止剂尚能使蓝色维持较长时间(12-24小时)不褪，是目视判断的良好终止剂。此外，各类酸性终止液则会使蓝色转变成黄色，此时可用特定的波长(450nm)测读吸光值
为什么间接法ELISA不能直接用酶标记
如果将酶标记到待测抗体上，相对经典的间接法更加繁琐，而且您在摸索标记条件时不能保证操作失误导致待测抗体失活；酶标二抗现在是已经商品化了的，被大规模生产，购买后使用方便。如果你的间接做的好的话，方法被优化了后，一抗二抗显色，总共的时间加起来，出结果不会超过2-3小时。
可以用直接ELISA法，就是用抗体包板，在抗原上标记酶，然后显色，这样与间接法相比就减少了一步，缩短了时间。
但是，直接法和间接法，他们各有优缺点，elisa试剂盒SCI文章需要根据实验具体要求而定。
1.待测抗体一般是免疫后产生的抗体，其中有免疫失败和抗体过少等因素存在，用酶标记有许多不确定性，如用酶标记前期有测不出效价的可能，造成不必要的困惑。
2.ELISA酶联免疫中酶标抗抗体和抗体结合后有巨大的信号放大作用，可以将信号扩大千倍以上，适合于较低抗体量的测定。
3.elisa试剂盒SCI文章筛出单抗后可以考虑直接酶标抗体，不过在确定测定体系上要费不少功夫。
elisa竞争法和阻断法区别
Elisa竞争法原理：将已知抗体或抗原固定于固体载相，酶标记待检测的抗原或抗体样本。
Elisa阻断法原理：将已知抗原固定于固体载相，酶标记待检测的单克隆抗体样本。
综上，二者检测方法的区别主要在于酶标记的样本类型。
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